柱式血液DNAout使用说明

1.在 0.02-1 mL 新鲜或抗凝血液（冷冻血需先 37℃水浴融化）中加入 0.5 mL红细胞裂解液（A 型），吹打混匀。

注意：溶液 A 非常容易长菌，取用需要在无菌条件下进行。 

    a) 哺乳动物，血液使用量以 300 uL 以下为宜，使用量越大产量越高，但产率会降低。如果血液多于 300 uL，重复 1-2 步两次可以提高产率。

    b) 禽类动物，血液使用量以 20 uL 以下为宜，可以从第 3 步做起。 

2. 室温 12,000-15,000 rpm 离心 5 分钟，沉淀呈粉红色，小心倾去上清。 

3. 再短暂离心半分钟，吸弃残留的液体。此步有利于后面的细胞裂解，但一般可以省略。

4. 向有沉淀的离心管内加入 0.5 mL 溶液 A（溶液 A 有少量晶体沉淀，用前需要摇晃均匀），用移液枪吹打使沉淀充分悬浮起来。此步目的是裂解细胞，释放 DNA，所以吹打越充分越好。

5. 静置 2 分钟待溶液变清亮后，将液体转移到离心吸附柱中并静置 2-5 分钟，以使 DNA 与膜充分结合。 

6. 12,000 rpm 离心半分钟，DNA 将吸附到膜上，弃收集管中的废液。 

7. 加入 0.7 mL 的通用洗柱液，12,000 rpm 离心半分钟，弃收集管中的废液。 

8. 加入 0.3 mL 的通用洗柱液，12,000 rpm 离心半分钟，弃收集管中的废液。

9. 12,000 rpm 离心半分钟，甩干残留液体。此步很重要，以去除膜上残留通用洗柱液，否则会影响后续反应。

10.将离心吸附柱置于一新的 1.5 mL 塑料离心管（自备）中，加入适量 30-100uLDNA 洗脱液 2.0，室温放置 2 分钟。如果将 DNA 洗脱液 2.0 在 65℃预热后再使用，洗脱 DNA 的效果会更好。 

11. 12,000 rpm 离心半分钟，离心管底溶液即 DNA 溶液。可以立即使用或放冰箱长期保存。