细胞培养实验室-无菌技术

细胞培养的成功很大程度上取决于保护细胞免受细菌、真菌和病毒等微生物的污染。非无菌物品、培养基和试剂、带有微生物的空气颗粒、不干净的培养箱和污染的工作台面均是导致微生物污染的来源。

无菌技术的作用是在环境微生物与无菌的细胞培养物之间形成一道屏障，它通过一套操作流程来降低培养物被上述污染源污染的可能。无菌技术的组成要素包括：无菌工作区 域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。

无菌工作区域

简单、经济的减少空气颗粒和气体挥发（例如：灰尘、芽抱、皮屑、喷嚏）污染的方 法就是采用细胞培养通风橱。

•细胞培养通风橱应正确设置，放置于专门用于细胞培养的区域，同时要避免来自门、 窗及其他设备的气流，不能有直接的来往通道。

•工作台面应保持整洁，只放置特定实验所需的物品；不能用作储存区域。

•使用前后均应*消毒工作台面，周围区域和设备应定期清洁。

•常规清洁时，工作前和工作过程中，特别是发生泼溅后，应使用70%乙醇擦拭工作 台面。

•使用完毕后，可用紫外灯对细胞培养通风橱内空气和暴露在外的工作台面进行消毒。

•在细胞培养通风橱内不需要也不建议使用煤气灯火焰。

•细胞培养通风橱应始终保持运转，长时间不使用时方可关闭。

良好的个人卫生

操作细胞培养物前后应洗手。穿戴个人防护设备不仅可保护您免受危险品污染，还可降 低皮屑以及衣服上污物和灰尘污染培养物的可能。

无菌试剂和培养基

商品化试剂和培养基经过严格的质量控制以确保其无菌性，但是在操作过程中这些产品 可能被污染。应遵循以下无菌操作原则以免污染。必须采用适当的灭菌方法（例如：高压 蒸汽、无菌过滤）对实验室中配制的所有试剂、培养基和溶液进行灭菌。

无菌操作

•必须用70%乙醇擦拭双手和工作区域。

•在将容器、培养瓶、培养板和培养皿放入细胞培养通风橱之前，必须用70%乙醇擦拭 其外部。

•不要从试剂瓶或培养瓶中直接倾倒培养基和试剂。

•使用无菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液体；每支吸管只能使用一次，以 免交叉污染。使用时方可打开无菌吸管的包装。吸管应始终位于工作区域内。

•试剂瓶和培养瓶用后必须盖上，用胶带将多孔板密封起来或者将其放入重复密封袋 中，以免微生物和空气污染物进入，污染培养物。

•无菌培养瓶、试剂瓶、培养皿等物品使用时方可揭开盖子，不得将其开放暴露于环境 中。操作完成后尽快盖上盖子。

•取下盖子时应将盖子开口朝下放在工作台面上。

•必须使用无菌玻璃器皿和其他设备。

•进行无菌操作时不要说话、唱歌或者吹口哨。

•尽快完成实验，以尽量避免污染。

无菌技术核对表

工作区域

细胞培养通风橱设置是否正确？

细胞培养通风橱所在区域有无气流和直接出入通道?

工作台面是否整洁？是否仅仅放置了实验所需的物品？

开始工作前用70%乙醇擦拭工作台面了吗？

是否定期对培养箱、冰箱、冰柜及其他实验室设备进行清洁和消毒?

个人卫生

您洗手了吗？

您穿戴个人防护设备了吗？

如果您留了长发，您把头发扎在后面了吗？

您是用移液器操作液体吗？

试剂和培养基

您采用适当的方法对实验室中配制的所有试剂、培养基和溶液进行灭菌了吗？

在将容器、培养瓶、培养板和培养皿放入工作台面之前，您用70%乙醇擦拭其外部 了吗？

试剂瓶、培养瓶及其他容器不使用时盖紧了吗？

是否已将所有培养板均放入无菌重复密封袋中？

是否有试剂外观浑浊？是否被污染了？试剂中有漂浮颗粒吗？有难闻气味吗？有颜 色异常吗？如果出现上述情况，是否已对其进行去污并丢弃？

操作

您操作时是否缓慢、谨慎、注意无菌技术了？

在将移液器、试剂瓶和培养瓶放入细胞培养通风橱之前，用70%乙醇擦拭其表面 了吗？

是否将盖子口朝下放置在工作区域？

您是使用无菌玻璃吸管或者一次性无菌塑料吸管操作液体吗？

无菌吸管是否仅仅使用一次以免交叉污染?

您是否注意到避免使吸管尖-端触碰到任何非灭菌物品包括瓶口螺纹的外缘?

发生液体泼溅时是否立即吸干并用70%乙醇擦拭该区域？