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非蛋白巯基测定试剂盒说明书

发布时间:2023/11/7      点击次数:313

非蛋白巯基测定试剂盒说明书

                                                  微量法100T/48S

 

 

   :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能,对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

 

测定原理:

巯基基团与5,5’-二硫代--硝基苯甲酸DTNB反应,生成黄色化合物,在412nm处有最大吸收峰。

 

自备实验用品:

天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板、乙醇和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

提取液:液体100 mL×1瓶,4保存。

试剂一:液体18 mL×1瓶,4保存。

试剂二:液体1mL×1管,4避光保存。

 

样品的制备:

1.        按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.        血清,培养液:取0.1mL样本,加入0.4mL提取液,混匀,室温静置10min, 然后8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

 

操作步骤:

1、   酶标仪预热30min,调节波长至412nm

2、   操作表

96孔板中加入如下试剂


对照管

测定管

样品(μL

40

40

试剂一(μL

150

150

试剂二(μL


10

乙醇μL

10


混匀,25℃静置10min,测定412nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。

 

计算公式:

非蛋白巯基标准曲线:y = 1.8111x - 0.0037R2 = 1x为标品浓度,单位μmol/mLy为吸光度ΔA

1. 组织:

1)按样本重量计算

 

非蛋白巯基含量(μmol/g 鲜重)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×V样总÷W

=0.552×(ΔA+0.0037)÷W

 

2)按样本蛋白浓度计算

非蛋白巯基含量(μmol/mg prot=(ΔA+0.0037)÷1.8111×V样总÷Cpr

=0.552×(ΔA+0.0037)÷Cpr

                                        

2. 血清、培养液:

非蛋白巯基含量(μmol/L=(ΔA+0.0037)÷1.8111×5×103

=2761×(ΔA+0.0037

 

V样总:加入提取液体积,1mLW:样品质量,g Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL5血清,培养液等液体样本稀释倍数;103 1mmol/ L=103μmol/ L

 

注意事项

Z低检出限为10μmol/L


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