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转基因大豆MON87705品系荧光PCR试剂盒

简要描述:转基因大豆MON87705品系荧光PCR试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织等样本中的转基因大豆MON87705品系,用于转基因大豆MON87705品系感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。

  • 更新时间:2024-06-27
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:765

详细介绍

品牌YLKBIO货号YLK10328P
规格50T供货周期现货
主要用途科研实验应用领域化工,生物产业
英文名称Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PC保存条件-20℃避光保存
有效期12 个月注意事项避免反复冻融,反复冻融不能超过 5 次
标本采集称取 200g 样品

转基因大豆MON87705品系荧光PCR试剂盒

【产品名称】

通用名称:转基因大豆MON87705品系荧光PCR试剂盒

Name:Transgenic soybean MON87705 line fluorescent PCR kit

【包装规格】50T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测转基因植物的 MON87705 基因,用于筛查待检测植物中是否含有 MON87705 成分。其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用国家标准的 MON87705 特异性引物和探针,用荧光 PCR 技术进行转基因成分的检测。

【试剂组成】

名 称

50T/盒

MON87705反应液

500μL×2 管

酶液

50μL×1 管

MON87705阳性质控品

50μL ×1 管

阴性质控品

250μL ×1 管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

称取 200g 样品。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 0℃冰壶。

【使用方法】

1.  样品处理(样本处理区)

1.1  样本前处理

固体样本:用粉碎机或冷冻研磨仪将样品研磨至细粉状。

1.2  DNA 提取

对于固体标本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推荐的方法:

1)  每个样品取 2 个平行管。称取 200mg 粉碎的样品,加入 1mL 预冷至 4℃的抽提液,剧烈摇动混匀后,在冰上静止 5min,4℃条件下 10000g 离心 15min,弃上清液;

2)  加入 600μL 预热至 65℃的裂解液,充分重悬沉淀,在 65℃恒温保持 40min,期间颠倒混匀 5 次;

3)  室温条件下10000g 离心10min,取上清液转移至新离心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒温 30min,分别用等体积苯/酚:异戊醇溶液和三氯jia烷:异戊醇溶液各抽提一次;

4)  室温条件下,10000g 离心 10min,取上清液至新离心管,加入三分之二体积的异丙醇,十分之一体积的 3mol/L 的乙酸钠溶液(pH=6.5),-20℃放置 2-3h;

5)  在 4℃条件下,10000g 离心 15min,弃上清液,用 70%乙醇洗涤沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

6)  加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即为样品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA/提取试剂盒。

油脂样本请直接选用市售油脂 DNA/提取试剂盒,按说明操作。

2.  试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

MON87705反应液

酶液

用量

20μL

1μL




3.  加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4.  PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1   将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2   设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;荧光通道选择: 检测通道

(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)选择 NONE,请勿选择ROX 参比荧光。

4.3   推荐循环参数设置:


步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec







5.结果分析判定

5.1  结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2  结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35<Ct 值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

6.  质控标准

阴性质控品:Ct>38 或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7.  检测方法的局限性

样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行;

试剂盒内各种组分使用前应自然融化,wan全混匀并短暂离心;

反应液应避光保存;

反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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