胡桃源性成分核酸检测试剂盒

物种鉴定系列中的过敏原鉴定试剂，可针对食品中过敏原成分的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。胡桃源性成分核酸检测试剂盒PCR-荧光探针法用于食品原料或加工食品中过敏原胡桃成分的检测，检出限为 0.01%。

请于-20℃条件下保存，有效期 15 个月

试剂

A-胡桃源-P :1000μL × 1 支

NG-P :100μL × 2 支

PG-胡桃源-P :100μL × 1 支

适用仪器 ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。

自备耗材和仪器 ①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属浴。

注意事项

1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。

1）第一区：试剂准备区。

2）第二区：样本制备区。

3）第三区：扩增及产物分析区。

★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。

2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。

3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。

4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要*解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30 秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。

6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

样品处理 参照《SN/T 1961.6-2013 出口食品过敏原成分检测 第 6 部分：实时荧光 PCR 方法检测胡桃成分》或其他标准 处理样品，制备的样本保存待用。 称取约 200g 样品，用洁净研钵或合适的粉碎装置将样品粉碎至粉末状用以提取 DN/A。 样品的采集和制备是过敏原成分鉴别的重要步骤，为防止交叉污染，应使用一次性消耗品，研钵应经 160℃干 烤 2 h，其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用 1%次氯酸钠溶液浸泡。其它防止交叉污染的措施按照 GB/T 27403 中的规定执行。

详细步骤请按照标准操作。

实验操作

1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）： 若有 N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个空白对照 NG+1 个 阳性对照 PG），涡旋混匀，离心 30 秒，分装于 0.2ml PCR 管中。

A-胡桃源-P:20×(N+2)μL

2.模板制备（样本制备区） 建议使用植物基因组提取试剂盒或深加工食品 DN/A 提取试剂盒等商品化试剂盒，具体过程详见产品说明书。 3.添加模板（样本制备区，放置于冰盒上进行） 向步骤 1 每管反应液中分别加入 5μL 模板，顺序为 NG、待测样品模板、PG-胡桃源-P。盖好配套的 PCR 管盖 后，涡旋混匀 30s，离心 1min，立即进行 PCR 扩增反应。 4.扩增反应（扩增及产物分析区） 使用荧光定量 PCR 仪，荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 NONE。 按下列条件设置扩增反应:

5.基线和阈值设定 基线范围选择一般在 6-15 个循环，如果有强阳性样本，应根据实际情况调整基线范围。阈值线应超过空白对照 扩增曲线的最高点，且 Ct 值不出现任何数值。

◆ 结果判定 检测样品 Ct 值≤35，则判定为被检样品阳性，检出过敏原胡桃成分。 检测样品 Ct 值≥40，则判定为被检样品阴性，未检出过敏原胡桃成分。 检测样品 35＜Ct 值＜40，则重复一次。如再次扩增后 Ct 值仍为＜40.0，则判定为被检样品阳性，检出过敏原 胡桃成分。如再次扩增后 Ct 值≥40，则判定为被检样品阴性，未检出过敏原胡桃成分。 ★ NG 反应为平滑直线，PG 反应为“S"型扩增曲线，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持 人员联系。

胡桃源性成分核酸检测试剂盒PCR-荧光探针法仅供科研。