简要描述:一步式染料法qRT-PCR试剂盒是基于荧光染料检测的即用型 RT-PCR 试剂盒,可以对靶 RNA 分子进行实时定量RT-PCR 分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。
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品牌 | YLKBIO | 纯度 | 详询 |
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货号 | YLK10358P | 规格 | 50T |
供货周期 | 现货 | 主要用途 | 科研实验 |
应用领域 | 化工,生物产业 | 中文名称: | 一步式染料法qRT-PCR试剂盒 |
英文名称: | One-Step?SYBR?qRT-PCR?Kit | 运输: | 低温运输 |
保存: | -20℃ | 有效期: | 1年 |
本产品是基于荧光染料检测的即用型 RT-PCR 试剂盒,可以对靶 RNA 分子进行实时定量RT-PCR 分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、逆转录酶、热启动 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 稳定剂、dNTPs、MgCl2 和稳定剂等所有实时定量 RT-PCR 所需要的成分,用户只需加入 RNA 模板和引物即可进行染料法实时定量 RT-PCR 反应,具有广泛的用途。
中文名称:一步式染料法qRT-PCR试剂盒
英文名称:One-Step SYBR qRT-PCR Kit
规格及成分
成 份 | 塑料袋包装 |
2×染料法 qRT-PCR 缓冲液 | 500 uL(橙色盖) |
10×染料法 qRT-PCR 酶混合液 | 100 uL(红色盖) |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输,-20℃保存, 不冻融时保存期限为 12 个月。如果需要每天使用,可在 4℃放置三周。
自备试剂:RNA 模板、引物、超纯水。
一步式染料法qRT-PCR试剂盒具有下列特点:
1.以 2×Mix 提供,用户只需准备模板、引物和 ROX 染料(取决于 qPCR 仪器)即可以进行染料法实时定量 RT-PCR 实验,非常方便快捷,降低了操作误差。 2.各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。灵敏度最高时可以达到 50 拷贝/反应(跟模板质量,引物设计等相关)。3.灵敏度和专一性比常规 RT-PCR 更高。 4.可用于基因表达分析、SNP 分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。5.本产品只能用于科研,1mL 足够 100 次 20uL 体系的染料法 qRT-PCR 反应。
使用方法:
如果有 N 个样品并且做定量分析,最好设置 N+7 个反应,多出的 7 个中,6 个是做标准曲线的阳性对照,一个是阴性对照(NC)。在 N+7 个 PCR 管中,加入下列成分。如果是做定性分析,则 6 个做标准曲线的样品缩减成一个阳性对照(PC),用户自己需要根据下表进行适当修改(把 6 个标曲反应改成 1 个阳性对照反应)。
成分N 个样品管6 个标准曲线管NC 管2×染料法 qRT-PCR 缓冲液 各 10 uL 各 10 uL 10 uL自备引物 1(10uM) 各 1 uL 各 1 uL 1 uL自备引物 2(10uM) 各 1 uL 各 1 uL 1 uLN 个自备模板 RNA 各 1-2 uL 不加 不加自备阳性对照模板(6 个梯度) 不加 各 1 uL(1 管加 1 个梯度) 不加阴性对照模板(水) 不加 不加 1 uL自备 50×ROX I 染料或自备 50×ROX II 染料(见注)各 0.4 uL 各 0.4 uL 0.4 uL10×染料法 qRT-PCR 酶混合液 2 uL 2 uL 2 uL补超纯水到 20 uL 20 uL 20 uL
注,下列信息仅供参考,具体以 qPCR 仪器的使用手册为准。1、不需要 ROX 的机型:Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、,、Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型号的荧光 PCR 仪器不需要加 ROX 染料,但加入的话也不会影响整个 PCR 分析。2、需要使用 ROX I 的机型:ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、StepOne Plus。3、需要使用 ROX II 的机型:ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、Corbett RotorGene 3000。2. 放入荧光 PCR 仪中进行扩增, 下表的扩增参数仅供参考,一定需要根据靶分子长度,引物的 Tm 值等进行调节。一般选择三步法 PCR:
数据处理如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性。一般情况下,阴性对照 Ct 大于或等于 40(阈值需要以阴性对照的 Ct 值确定,此处为便于叙述以 40 为例,具体情况很可能阈值不一样)。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。
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