简要描述:还原型抗坏血酸(AsA)含量测定试剂盒测定意义:AsA又称维生素C。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
产品分类
Product Category详细介绍
品牌 | YLKBIO | CAS | 详见说明书 |
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分子式 | 详见说明书 | 纯度 | 详见说明书 |
分子量 | 详见说明书 | 货号 | YLK-SH138 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 科研 | 应用领域 | 化工,生物产业 |
测定方法: | 微量法、可见分光光度法 |
还原型抗坏血酸(AsA)含量测定试剂盒说明书
微量法100T/96S
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
AsA又称维生素C。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
测定原理:
在乙酸溶液中,抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物,在最大吸收波长420处测定吸光度。
自备仪器和用品:
研钵、冰、低 温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体4mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×2瓶(棕色),4℃避光保存。临用前配制,每瓶加入7 mL蒸馏水充分溶解,用不完的试剂4℃下可保存3天。
样品中AsA提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);8000g,4℃离心20min,取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体:直接测定。
AsA测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到420 nm,蒸馏水调零。
2.在EP管中加入下列试剂
试剂名称(µL) | 测定管 | 空白管 |
样本 | 100 | |
提取液 | 100 | |
试剂一 | 30 | 30 |
试剂二 | 50 | 50 |
试剂三 | 120 | 120 |
水 | 700 | 700 |
混匀,25℃静置20min,吸取200µL加入微量石英比色皿/96孔板中,420nm下测定各管吸光值。ΔA=A测定-A空白。
注意:标准管只需测定一次。
AsA含量计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线y = 0.0088x - 0.018 ,R2 = 0.9978
(1). 按蛋白浓度计算
AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V样÷(Cpr×V样)
=113.63×(ΔA+0.018)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V样÷(W×V样÷V样总)
=113.63×(ΔA+0.018)÷W
(3). 按细胞数量计算
AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V样÷(细胞数量×V样÷V样总)
=113.63×(ΔA+0.018)÷细胞数量
(4)按液体体积计算
AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0088
=113.63×(ΔA+0.018)
V样:加入样品体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g)。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线y = 0.0044x - 0.018 ,R2 = 0.9978
(1). 按蛋白浓度计算
AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V样÷(Cpr×V样)
=227.27×(ΔA+0.018)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V样÷(W×V样÷V样总)
=227.27×(ΔA+0.018)÷W
(3). 按细胞数量计算
AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V样÷(细胞数量×V样÷V样总)
=227.27×(ΔA+0.018)÷细胞数量
(4)按液体体积计算
AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0044
=227.27×(ΔA+0.018)
V样:加入样品体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g)。
注意事项:
试剂三现配现用,配制好的4℃保存,3天内使用完。
还原型抗坏血酸(AsA)含量测定试剂盒仅供科研!
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