简要描述:蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒测定意义:SP(EC2.4.1.7) 要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖 木糖 半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基 聚糖 外,SP 还能催化氢/醌合成熊果苷,具有ji强的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用。
产品分类
Product Category详细介绍
品牌 | YLKBIO | CAS | 详见说明书 |
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分子式 | 详见说明书 | 纯度 | 详见说明书 |
分子量 | 详见说明书 | 货号 | YLK-SH128 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 科研 | 应用领域 | 化工,生物产业 |
测定方法: | 微量法、紫外分光光度法 |
蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒说明书
微量法100T/96S
测定意义:
SP(EC2.4.1.7) 要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖 木糖 半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基 聚糖 外,SP 还能催化氢/醌合成熊果苷,具有ji强的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用
测定原理:
SP 能够以磷酸体,催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸 酶催化6-磷酸葡萄糖,在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用还原 NADP+生成 NADPH,导340nm光吸收值增测定 340nm 吸光度增 速率,即可算SP活性
自备实验用品及仪器:
天平温离心机 恒温水浴锅 紫外分光光度 /酶标仪 微 石英比色皿/96 孔板和蒸馏水
试剂组成和配制:
提 液 液体 100mL×1 瓶,4℃保存
缓冲液 液体 10mL×1 瓶,4℃保存
试剂一 液体 5mL×1 瓶,4℃保存
试剂二 液体 1.5mL×1 支,4℃保存
试剂 液体 1mL×1 支,4℃保存
试剂四 粉剂 1 支,-20℃避光保存,临用前 1mL 蒸水溶解
试剂五 粉剂 1 支,-20℃避光保存,临用前 1mL 蒸水溶解
试剂 粉剂 1 支,-20℃避光保存,临用前 2mL 蒸水溶解
试剂七 粉剂 1 支,-20℃避光保存,临用前 2mL 蒸水溶解
粗酶液提取:
1. 组按照组质g提液体 (mL) 15~10 的比例 建议约0.1g组,入1mL提液 进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 10min,清测
2. 菌真菌按照胞数104 个提液体mL500~10001 的比例建议500万胞入1mL提液 ,冰浴超声波破碎胞率300w,超声 3 ,间隔7,总时间 3min然后10000g,4℃,离心 10min,清置于冰测
测定操作表:
1分光光度 /酶标仪预热 30min,调节波长 340nm 2、操作表
对照管 | 测定管 | ||||||
缓冲液 µL | 85 | 65 | |||||
试剂一 µL | 50 | 50 | |||||
试剂二 µL | 3 | 3 | |||||
试剂 | µL | 2 | 2 | ||||
试剂四 µL | 10 | 10 | |||||
试剂五 µL | 10 | 10 | |||||
试剂 | µL | 20 | 20 | ||||
试剂七 µL | 20 | 20 | |||||
混匀,37℃水浴预热 5min | ||
样本 µL | 20 | |
迅速混匀,于微 石英比色皿/96 孔板,对照管调零,测定 340nm 的初始值 A1,测定完立即放入 37℃水浴准确 应 2min,对照管调零,迅速测定 340nm 吸光值 A2,△A= A2- A1 |
SP 活性计算公式:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式
1. 按照蛋白浓度 算
酶活定义 37℃,pH6.8 时, 毫克蛋白质 分钟催化产生 1nmol NADPH 一个酶活单
SP 活性 nmol/min/mg prot = | ∆A | 总÷V 样÷Cpr÷T=804×△A÷Cpr | |
×V |
ε × d
2. 按照样本质 算
酶活定义 37℃,pH6.8 时,
克样本 分钟催化产生 1nmol NADPH 一个酶活单
SP 活性 nmol/min/g 鲜重 = | ∆A | 总÷(V 样÷V 样总×W)÷T=804×△A÷W | |
×V |
ε × d
3. 按照 胞数算
酶活定义 37℃,pH6.8 时, 104 个 胞 分钟催化产生 1nmol NADPH 一个酶活单
SP 活性 nmol/min/104 cell = | ∆A | 总÷(V 样÷V 样总× | 胞数 | 万个 )÷T=804×△ | |
×V |
ε × d
A÷ 胞数 万个
ε NADPH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm d 比色皿光 ,1cm V
体 ,2mL V 样 应体系中样本体 ,0.2mL W 样本质 ,g Cpr
总 应体系总
蛋白浓度,mg/mL
T 应时间,2min
b.用 96 孔板测定的计算公式
1. 按照蛋白浓度 算
酶活定义 37℃,pH6.8 时, 毫克蛋白质 分钟催化产生 1nmol NADPH 一个酶活单
SP 活性 nmol/min/mg prot = | ∆A | 总÷V 样÷Cpr÷T=1608×△A÷Cpr | |
×V |
ε × d
3. 按照样本质 算
酶活定义 37℃,pH6.8 时,
克样本 分钟催化产生 1nmol NADPH 一个酶活单
SP 活性 nmol/min/g 鲜重 = | ∆A | 总÷(V 样÷V 样总×W)÷T=1608×△A÷W | |
×V |
ε × d
3. 按照 胞数算
酶活定义 37℃,pH6.8 时, 104 个 胞 分钟催化产生 1nmol NADPH 一个酶活单
SP 活性 nmol/min/104 cell = | ∆A | 总÷(V 样÷V 样总× | 胞数 | 万个 )÷T=1608× | |
×V |
ε × d
△A÷ 胞数 万个
ε NADPH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm d 比色皿光 ,0.5cm V 总 应体系总
体 ,2mL V 样 应体系中样本体 ,0.2mL W 样本质 ,g Cpr 蛋白浓度,mg/mL
T 应时间,2min
注意事项:
1. 粉剂-20℃保存,配制好的试剂 3 天内使用完
2. 可选用 BCA 法测定蛋白含 试剂盒测定蛋白含
蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒仅供科研!
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